亨利八世的第一位妻子是阿拉貢的凱瑟琳，系西班牙阿拉貢國王斐迪南二世和卡斯蒂利亞女王伊莎貝拉一世之女。凱瑟琳為亨利八世生育了幾次，但只養大一個女兒瑪麗，其余都早夭。1525年，亨利認定凱瑟琳不能為他生下男性繼承人，且和女侍官安妮·博林發生婚外情，因此向羅馬教廷申請離婚。但是，教皇拒絕批準離婚，安妮·博林卻已經懷孕。亨利八世隨即展開了一些列行動，宣布英國教會脫離羅馬，廢除了羅馬教廷在英國的權威，他本人則出任英格蘭最高宗教領袖。

1533年1月，亨利秘密與安妮·博林結婚，英國國會隨即立法脫離羅馬教廷，大主教克蘭麥接著宣布亨利與凱瑟琳的婚姻無效，與安妮·博林的婚姻合法。6月1日，安妮·博林加冕為英格蘭王后。三個月后，她生下女兒伊麗莎白(后來的英王伊麗莎白一世)。亨利為了迎娶新王后，激進的宗教改革，但很快兩人的關系就已冷卻。主因是安妮·博林生下伊麗莎白公主后，再兩次的懷孕失敗，一次流產，一次死產，打擊到亨利尋求男性繼承人的希望。可能是克倫威爾鼓動，亨利下令拘禁安妮·博林，罪名幾乎都是叛國罪，但極可能都是編造。包括：以巫術誘使國王結婚、與五個男人通奸、與兄弟喬治·博林亂倫、傷害國王、預備謀殺國王，和試圖毒害亨利八世的私生子亨利·菲茨羅伊。

審判法庭由安妮·博林的舅舅托馬斯·霍華德主持。1536年 5月，法庭宣判安妮·博林及其兄弟死刑，由國王決定是火刑或斬首。兩人很快被斬首。安妮·博林在最后彌撒時，對牧師和其他見證人堅稱自己無罪。四名通奸男子判處車裂，后來減刑為斬首。

安妮·博林被斬首的第二天，亨利與他的侍女珍·西摩訂婚，十天后正式結婚，并以新通過的第二部王位繼承法，宣布新王后的子女將是順位繼承人;之前的子女瑪麗和伊麗莎白乃私生子，剝奪其繼承權;國王且擁有以遺囑重新指定繼承人的權利。隔年的 1537年，珍生下兒子愛德華(后來的愛德華六世)，卻在同年10月24日因產褥熱逝世于格林威治。亨利哀悼了比較長的時間，因為珍生下他渴望已久的唯一男性繼承人，被他視為唯一“真正的”妻子。